分子生物工具书之：碱基纯化-DNA

▋ DNA 转化课程内容

人们如今对 DNA 的量化，通常是通过多重 PCR、real-time PCR 和对稀少惨剧的研究来进行时的，因此得益于转化 DNA 非常关键。得益于的量化产物是获得得益于的河段样品结果的必要有条件。我们须要了解 DNA 转化系统的工作理论，然后针对先前分析方法选择最适合的化学更加进一步。

DNA 转化少用的挑战

● 乙烯样品从而释放 DNA● 将 DNA 分子与脂质、核糖体、果糖和 RNA 等其他分子乙烯● 保持 DNA 分子的连续性

DNA 举例来说相同陷于的挑战也相同。例如巧克力等食品，其中都含有色氨酸的氟化物，如果这些氟化物被已转化的 DNA 携偷偷地，则可能抑制河段的样品。从革兰氏阳性病原体中都乙烯 DNA 无无需高效的乙烯病原体厚厚的肽聚糖上皮线粒体。一定要确保你运用于的 DNA 转化新方法并不无需要解决抽样陷于的难题。

温馨若有：血液和组织抽样在运用于前无需冷冻保存，以尽量减少脱氧核糖小分子对 DNA 的摧残。在装进一小部分进行时 DNA 转化之前无需将解冻后的血液基本上混合。

DNA 转化基本步骤

DNA 转化：乙烯、常与辅常与成和净化

乙烯：摧残线粒体或组织-复合物不远处理-机械摧残-去垢剂不远处理

乙烯：使核糖体自体或夺去活性-氯离子去垢剂、加热、氧化剂、甲醇和胍类-糖类（如糖类 K）

乙烯：使内源性脱氧核糖小分子-螯合剂（例如 EDTA）-糖类（例如 糖类 K）

常与辅常与成与净化：乙烯 DNA-消除其他小分子（如 RNA）-消除核糖体 •有机提取物 •皂析 •与固常与表现形式常与辅常与成 -硅酸皂内皮 -锂共享廊柱 -磁力胶体

常与辅常与成与净化：从其他线粒体微粒中都乙烯 DNA 的新方法

■ 有机提取物

当吡啶或吡啶: 固体与线粒体乙烯物混合时，不会形成两常与：水常与和有机常与。溶剂 DNA 分子转入溶剂常与或「水常与」，而自体的核糖体和其他线粒体打碎则转入有机常与。

■ 皂析

皂可以让核糖体脱水，从而降低其亲水性，然后自体，自体后的核糖体失掉溶解性从而溶解；通过离心法消除溶解的核糖体和线粒体打碎。常用的皂包括包括氯化钠、乙酸钾或乙酸铵。

■ 与固常与表现形式常与辅常与成

绝大多数的 DNA 转化新方法主要依据的理论是：通过依赖性地与固常与表现形式常与辅常与成, 从而从粗乙烯物中都转化 DNA。这类固常与表现形式包括硅酸皂表现形式和锂共享树脂。通常来说，运用于固常与表现形式转化 DNA 比其他新方法用时更加窄、操作更加便捷，因为不无无需任何有机溶剂，而且可以微型化和自动化从而充分利用高通量。

与 DNA 常与辅常与成的固常与表现形式多种类型

硅酸皂内皮：DNA 不会在高pH离液皂（例如皂酸胍）存在的情况下与硅酸皂常与辅常与成，但是核糖体不不会。可以运用于含有吡啶的净化液都为皂，然后在低氯离子强度的皂酸（例如 TE 或水）中都洗脱 DNA。

锂共享廊柱：转化的主要理论是 DNA 中都偷偷地水分子的酰基团与共享廊柱上偷偷地正电荷的分子之间常与互作用。在低皂有条件下，DNA 与表现形式常与辅常与成，而核糖体和 RNA（一般来说所用的缓冲液）则被净化都为。DNA 可以用高皂缓冲液洗脱。

在胶体表面进行时的 DNA 磁力乙烯：许多具体表现试剂盒的工作理论是运用于磁力胶体从皂酸中都脱逃 DNA。磁力胶体可以由硅酸皂等物料作成，DNA 的常与辅常与成和洗脱一般来说皂pH或 pH。

DNA 、pH和连续性

纯的、完整的 DNA 对于许多河段量度至关关键。常用检验 DNA 的常用新方法是在 260nm 的光波不远处（DNA 在该光波下有第二大吸收峰）量度抽样吸伴星。通过量度 280nm 光波不远处的吸伴星，并且计算 260nm 与 280nm 不远处的吸伴星之比，可以样品出转化更加进一步中都可能运用于到的或残留在抽样中都的其他有机氟化物。荧光染料和 qPCR 是计算 DNA pH并确定制品连续性的替代新方法，主要在本指南先前关于小分子表征章节进行时简要讨论。

照片举例来说：普洛麦格